玉米籽粒氮含量遗传位点挖掘及候选基因预测

王利锋; 王森; 蔡齐宗; 王浩; 周柯; 杨继伟; 李晶晶; 贾腾蛟; 张站壹; 王景; 李会勇; WANG Lifeng; WANG Sen; CAI Qizong; WANG Hao; ZHOU Ke; YANG Jiwei; LI Jingjing; JIA Tengjiao; ZHANG Zhanyi; WANG Jing; LI Huiyong

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玉米籽粒氮含量遗传位点挖掘及候选基因预测 PDF

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王森 ^1,2
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1. 河南省农业科学院农作物种质资源研究所，郑州 450002； 2. 河南大学生命科学学院，开封 475001

最近更新：2024-08-30

DOI：10.13430/j.cnki.jpgr.20231227001

摘要

玉米籽粒氮含量与品质紧密相关，其遗传机制的解析对玉米品质育种具有重要意义。本研究以252份玉米自交系为关联群体，利用贝叶斯信息与连锁不平衡迭代嵌套式模型（BLINK，bayesian-information and linkage-disequilibrium iteratively nested keyway）、固定随机循环概率模型（FarmCPU，fixed and random model circulating probability unification）、一般线性模型（GLM，general linear model）、混合线性模型（MLM，mixed linear model）、多位点混合线性模型（MLMM，multiple loci mixed model）和逐步排它性混合线性模型（SUPER，settlement of MLM under progressively exclusive relationship）等方法分别对其籽粒氮含量进行全基因组关联分析。共鉴定到13个与籽粒氮含量显著关联的SNP（P<3.64E-07）。BLINK、FarmCPU、GLM、MLM、MLMM和SUPER方法分别检测到6个、3个、7个、4个、2个和4个SNP位点。其中，S3_8879213在5种方法中均能检测到，S9_146173702在4种方法中均能检测到，S5_114774030和S7_182217338在3种方法中均能检测到，S1_10906326和S1_177528813 在2种方法中均能检测到。共挖掘25个相关候选基因，其中Zm00001eb275080和Zm00001eb330700可能是影响玉米籽粒氮含量的重要候选基因。

关键词

玉米; 籽粒; 氮含量; 全基因组关联分析; 候选基因

玉米（Zea mays L.）作为我国第一大作物，在粮食、饲料和加工等行业发挥重要作用，有效保障国民经济和粮食安全^［

1］。随着经济的发展和消费结构的改变，对玉米籽粒品质提出了更高的要求，育种目标也逐渐从高产向高产和优质协同方向发展^{［参考文献 2

百度学术}2］。玉米籽粒氮含量是重要的品质性状之一。研究表明，在玉米商业化品种推广应用过程中，虽然产量不断提升，但籽粒氮含量显著下降，阻碍了高产和优质的协同^{［参考文献 3

百度学术}3］。因此，在保障玉米品种高产基础上，如何更有效地提高其籽粒氮含量是今后重要的发展方向。

玉米籽粒氮含量是受多基因控制的数量性状，挖掘相关性状QTL是解析其遗传机制的重要基础。Hirel小组利用重组自交系群体，分别对玉米氮效率的相关酶、籽粒产量及氮含量（籽粒、秸秆、整株等）等性状进行遗传分析，发现许多生理性状及产量性状的QTL与氮含量相关基因存在共定位^［

4-7］。Wassom等^{［参考文献 8

百度学术}8］利用IHO×B73的回交群体定位到12个与玉米籽粒蛋白质含量相关的QTL位点，其中2个主效QTL位点位于第6号和第9号染色体上。Zhang等^{［参考文献 9

百度学术}9］利用许178和P53构建的重组自交系群体，在6个不同环境下定位到25个玉米籽粒蛋白质含量相关QTL位点。Yang等^{［参考文献 10

百度学术}10］利用B73和郑58的165个家系，共定位到10个蛋白质含量相关QTL位点。赵志鑫等^{［参考文献 11

百度学术}11］利用许178和K12构建的重组自交系群体，共定位到9个玉米籽粒蛋白质含量显著相关QTL位点，其中位于第4号染色体umc1194~umc2384区间的QTL，在多种环境中均能检测到，被认为是主效QTL位点。李冉冉等^{［参考文献 12

百度学术}12］利用KA105和KB020构建的RIL群体，在不同授粉方式下进行玉米籽粒品质相关性状QTL检测，共检测到2个蛋白质含量相关QTL。

玉米种质资源是新品种选育的物质基础，不同基因型玉米种质资源的籽粒蛋白质含量间存在显著差异^［

13-15］。本研究利用252份玉米自交系构建的关联群体，通过6种不同的方法对2个环境下的关联群体的籽粒氮含量进行全基因组关联分析，旨在挖掘显著关联位点，预测相关候选基因，并筛选籽粒氮含量高的优异种质，为玉米籽粒氮含量种质创新及遗传机理解析奠定基础，并为进一步选育高产、优质玉米新品种提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验采用的关联群体来源于本课题组收集和自选材料，其中包括国内优异自交系107份，国外过保护期自交系132份，优异自选系13份，共252份。于2022年夏季分别种植在河南省农业科学院基地（河南新乡原阳）和周口郸城县农业科学研究所基地（河南周口郸城）。采用随机区组试验设计，2行区，双粒播，行距60 cm，株距25 cm，每行15株，3个重复。

1.2 籽粒氮含量测定及分析

于收获期连续收获每个小区每个穗行中部植株果穗3穗，自然晾干，脱取每个果穗的中部籽粒，混合均匀后粉碎。基于本课题组前期构建的近红外籽粒氮浓度预测模型，每份样品选取5 g，利用赛默飞傅立叶变换近红外光谱仪（Antaris II）测定关联群体材料2个环境3个重复的籽粒氮浓度，并乘以多重复单籽粒重的平均值，计算籽粒氮含量。利用Microsoft Excel 2010整理数据，IBM SPSS 20.0进行基本描述、方差等表型性状数据分析。

1.3 基因型鉴定和分析

采用GBS（Genotyping by sequencing）简化测序的方法对252份自交系进行基因型分型，测序仪为Illumina HiSeq PE150，双端测序。利用BWA软件比对到B73（RefGen V5）版参考基因组（https：//ftp.ebi.ac.uk/ensemblgenomes/pub/release-57/plants/gff3/zea_mays/Zea_mays.Zm-B73-REFERENCE-NAM-5.

0.57.chr.gff3.gz）。采用SAMTOOLS软件进行群体SNP的检测，以缺失率小于0.10、杂合率小于0.10、最小等位基因频率大于0.05为筛选标准，共获得137492个高质量SNP用于全基因组关联分析^［

16-17］。

1.4 全基因组关联分析

利用GAPIT（Genome associated prediction integrated tool）软件包完成6种不同模型的2个环境下关联群体平均籽粒氮含量的全基因组关联分析，分别为贝叶斯信息与连锁不平衡迭代嵌套式模型（BLINK， bayesian-information and linkage-disequilibrium iteratively nested keyway）、固定随机循环概率模型（FarmCPU，fixed and random model circulating probability unification）、一般线性模型（GLM，general linear model）、混合线性模型（MLM，mixed linear model）、多位点混合线性模型（MLMM，

multiple loci mixed model）和逐步排它性混合线性模型（SUPER， settlement of MLM under progressively

exclusive relationship），显著临界值设置为P=0.05/137492=3.64E-07。

采用玉米籽粒氮含量显著性SNP位点上下游各50 kb的区段用于该位点候选基因预测（参照B73（RefGenV5）基因组序列信息），区段内候选基因筛选和功能注释通过MaizeGDB数据库（https：//maizegdb.org/）完成，并利用DAVID数据库（https：//david.ncifcrf.gov/）在线进行GO和KEGG富集分析。候选基因在缺氮和施氮处理下的基因表达谱分析数据引自PRJNA587226 （https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/bioproject/PRJNA587226），并利用R语言heatmap包，K-means聚类方式作图。

2 结果与分析

2.1 关联群体籽粒氮含量表型分析

2个环境下关联群体籽粒氮含量结果表明，其变异范围在3.03~9.31 mg之间，不同自交系籽粒氮含量间存在广泛的遗传变异。从直方图的拟合曲线上来看，在2个环境条件下，关联群体籽粒氮含量均符合正态分布（图1）。单因素方差分析发现，2个环境的关联群体籽粒氮含量间无显著差异，说明受环境影响较小。

图1 不同环境籽粒氮含量频次分布

Fig. 1 Frequency distribution of grain nitrogen content in different environments

2.2 籽粒氮含量全基因组关联分析

利用6种不同的全基因组关联分析方法，对2个环境的玉米关联群体籽粒氮含量进行SNP显著位点挖掘，共检测到13个与籽粒氮含量显著关联的SNP位点（表1）。其中，BLINK方法检测到6个显著SNP位点，分别位于第1、2、3、5、7和9号染色体（P=4.39E-14~5.87E-08）。FarmCPU方法检测到3个显著SNP位点，分别位于第1、8和9号染色体（P=2.61E-15~1.86E-07）。GLM方法检测到7个显著SNP位点，分别位于第1、3、4、5、7和9号染色体（P=4.50E-09~1.50E-07）。MLM方法检测到4个显著SNP位点，分别位于第3、5、7和9号染色体（P=4.13E-09~1.89E-07）。MLMM方法检测到2个显著SNP位点，分别位于第3和9号染色体（P=7.52E-09~7.63E-09）。SUPER方法检测到4个显著SNP位点，分别位于第1、3、5和6号染色体（P=4.82E-09~7.76E-08）。

表1 籽粒氮含量显著关联的SNP位点和候选基因

Table 1 Significant SNPs and candidate genes of grain nitrogen content

SNP名称 SNP name	染色体 Chr.	位置（bp） Position	方法 Methord	环境 Environment	P值 P value	候选基因 Candidate gene
S1_10906326	1	10906326	BLINK	郸城	4.74E-09	Zm00001eb003910，Zm00001eb003920，Zm00001eb003930
S1_10906326	1	10906326	FarmCPU	郸城	2.61E-15	Zm00001eb003910，Zm00001eb003920，Zm00001eb003930
S1_177528813	1	177528813	GLM	郸城	1.50E-07	Zm00001eb031710，Zm00001eb031700，Zm00001eb031720
S1_177528813	1	177528813	SUPER	郸城	1.88E-08	Zm00001eb031710，Zm00001eb031700，Zm00001eb031720
S2_26621756	2	26621756	BLINK	原阳	1.62E-10	Zm00001eb076310
S3_8879213	3	8879213	BLINK	原阳	4.39E-14	Zm00001eb121990，Zm00001eb122000，Zm00001eb121920
			GLM		4.50E-09
			MLM		4.13E-09
			MLMM		7.52E-09
			SUPER		7.76E-08
S3_224090740	3	224090740	GLM	郸城	3.11E-08	Zm00001eb159780
S4_221605237	4	221605237	GLM	郸城	9.00E-08	Zm00001eb202470
S5_61436895	5	61436895	BLINK	原阳	2.13E-12	Zm00001eb227670，Zm00001eb227680，Zm00001eb227690
S5_114774030	5	114774030	GLM	原阳	5.93E-08	Zm00001eb235460
			MLM		7.08E-08
			SUPER		1.79E-08
S6_106080325	6	106080325	SUPER	原阳	4.82E-09	Zm00001eb275080
S7_182217338	7	182217338	BLINK	原阳	3.69E-11	Zm00001eb330680，Zm00001eb330700，Zm00001eb330710，Zm00001eb330690，Zm00001eb330720
			GLM		3.91E-08
			MLM		4.16E-08
S8_158491327	8	158491327	FarmCPU	郸城	8.29E-08	Zm00001eb361270
S9_70909760	9	70909760	BLINK	原阳	5.87E-08	Zm00001eb383670
S9_146173702	9	146173702	FarmCPU	郸城	1.86E-07	Zm00001eb397820
			GLM		7.65E-08
			MLM		1.89E-07
			MLMM		7.63E-09

其中位于第1号染色体标记S1_10906326和S1_177528813、第3号染色体的标记S3_8879213、第5号染色体标记S5_114774030、第7号染色体标记S7_182217338和第9号染色体标记S9_146173702在多种方法中均能检测到，为主效SNP位点（表1，图2，图3）。

图2 原阳籽粒氮含量显著SNP的曼哈顿图和QQ图

Fig. 2 Manhattan plots and quantile-quantile plots for significant SNP for grain nitrogen content in Yuanyang

图3 郸城籽粒氮含量显著SNP的曼哈顿图和QQ图

Fig. 3 Manhattan plots and quantile-quantile plots for significant SNP for grain nitrogen content in Dancheng

2.3 籽粒氮含量相关候选基因挖掘

根据检测到的13个显著SNP位点，共挖掘到25个籽粒氮含量相关候选基因（表1）。利用DAVID数据库对25个候选基因进行富集分析。GO分析显示，在生物进程方面，参与信号传导（Signaling）、发育和代谢（Developmental and metabolic process）、细胞定位（Localization）及生物调控（Biological regulation）等功能。在细胞组分层面，这些候选基因富集于细胞解剖结构（Cellular anatomical entity）、细胞内（Intracellular）、蛋白质复合物（Protein-containing complex）等。在分子功能方面，主要涉及结合（Binding）、催化活性（Catalytic activity）、转录调控活性（Transcription regulator activity）等（图4）。此外，KEGG分析显示，主要参与二萜类化合物合成（Diterpenoid biosynthesis）、类黄酮合成（Flavonoid biosynthesis）、磷脂酰肌醇信号通路（Phosphatidylinositol signaling system）、泛素介导的蛋白质降解（Ubiquitin mediated proteolysis）、植物MAPK信号通路（MAPK signaling pathway-plant）以及植物激素信号转导（Plant hormone signal transduction）等代谢和信号传导过程（图5）。

图4 GO通路富集分析

Fig. 4 GO enrichment analysis

图5 KEGG通路富集分析

Fig. 5 KEGG enrichment analysis

其中，第1号染色体Bin1.01区域候选基因Zm00001eb003910（lbd1）编码LBD转录因子1；Zm00001eb003920（rtcs1）编码RTCS LOB结构域蛋白；Zm00001eb003930（pco140232）编码类HR病斑诱导蛋白。Bin1.05区域候选基因Zm00001eb031700（arftf34）编码ARF转录因子34。第3号染色体Bin3.03区域候选基因Zm00001eb121990（IDP7678）编码1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶；Zm00001eb122000（uaz277（201））编码F-box结构域蛋白；Zm00001eb121920（si946086a04）编码多核苷酸5'-羟基激酶NOL9。Bin3.09区域Zm00001eb159780（cenpc1）编码着丝粒蛋白C1。第5染色体Bin5.09区域候选基因Zm00001eb227670（ppr288）编码五肽重复蛋白288。第6号染色体Bin6.02区域候选基因Zm00001eb275080（wrky114）编码WRKY转录因子114。第7号染色体Bin7.05区域候选基因Zm00001eb330680（bzip58）编码bZIP转录因子58；Zm00001eb330700编码液泡分选受体1；Zm00001eb330710（wrky17）编码WRKY转录因子17；Zm00001eb330690（abi32）编码休眠调节蛋白；Zm00001eb330720编码E3泛素蛋白连接酶。第9号染色体Bin9.06区域候选基因Zm00001eb397820（kao2）编码异贝壳杉烯酸氧化酶2。

基于氮响应转录组数据进行候选基因预测，发现Zm00001eb275080和Zm00001eb330700这2个候选基因对氮处理表现出极显著的表达水平差异^［

18］，因此认为这2个基因是影响玉米籽粒氮含量的重要候选基因（表2，图6）。

表2 候选基因转录组学丰度［log2（TPM+1）］^{［参考文献 18

百度学术}18］

Table 2 Transcriptional abundance of candidate genes ［log2（TPM+1）］^{［参考文献 18

百度学术}18］ in RNA-Seq analysis

候选基因 Candidate genes	缺氮1 Nitrogen deficiency 1	缺氮2 Nitrogen deficiency 2	缺氮3 Nitrogen deficiency 3	施氮1 Nitrogen application1	施氮2 Nitrogen application2	施氮3 Nitrogen application3	倍性变化 Fold change	P值 P_value
Zm00001eb003910	4.39	4.45	4.62	2.61	2.64	2.53	0.58	0.00
Zm00001eb003920	2.36	1.87	2.06	1.57	1.02	1.75	0.69	0.03
Zm00001eb031710	2.49	1.22	2.63	2.28	2.18	0.99	0.86	0.37
Zm00001eb031700	0.97	1.19	0.00	0.00	0.47	1.45	0.89	0.46
Zm00001eb031720	0.97	0.55	1.08	1.58	1.65	1.71	1.90	0.02
Zm00001eb121990	4.02	3.55	4.18	5.42	5.51	5.46	1.39	0.01
Zm00001eb122000	4.35	3.89	4.54	4.30	4.20	4.25	1.00	0.48
Zm00001eb121920	4.33	3.69	4.41	4.21	3.83	3.96	0.97	0.25
Zm00001eb159780	2.18	1.61	2.37	2.38	2.19	2.14	1.09	0.26
Zm00001eb202470	1.91	1.08	1.71	1.95	2.07	1.96	1.27	0.14
Zm00001eb227670	0.88	0.26	0.89	0.09	0.61	0.64	0.66	0.28
Zm00001eb227680	1.53	1.16	1.71	1.97	1.58	1.56	1.16	0.17
Zm00001eb227690	4.31	4.83	4.72	4.46	4.09	4.32	0.93	0.17
Zm00001eb235460	4.55	4.50	4.66	4.01	4.23	4.02	0.89	0.03
Zm00001eb275080	1.17	0.73	0.87	5.02	5.25	5.09	5.53^***	0.00
Zm00001eb330680	2.99	2.17	0.00	3.21	3.41	3.15	1.89	0.11
Zm00001eb330700	0.57	0.26	0.41	2.90	2.62	2.74	6.66^***	0.00
Zm00001eb330710	3.48	3.00	3.57	3.91	4.02	3.95	1.18	0.05
Zm00001eb330690	3.61	2.04	3.47	4.09	4.12	4.09	1.35	0.09
Zm00001eb330720	1.64	0.64	2.53	3.00	3.20	3.05	1.93	0.06
Zm00001eb383670	5.70	6.33	5.96	5.26	5.21	5.16	0.87	0.03
Zm00001eb397820	4.42	3.74	4.46	5.66	5.66	5.67	1.35	0.01

倍性变化指不同处理间的差异倍数，^*** 表示P<0.001显著水平

Fold change refers to the multiple of differences between different treatments，^***indicates significant at the P<0.001 level

图6 候选基因在缺氮和施氮处理下的基因表达谱

Fig. 6 Gene expression profiles of candidate genes under nitrogen deficiency and nitrogen application treatments

Def.：缺氮处理；N.：施氮处理；1~3为重复

Def.：Nitrogen deficiency treatment； N.：Nitrogen application treatment；1-3 indicates repetition

3 讨论

籽粒氮含量（蛋白质含量）是影响玉米品质的重要性状之一，深入研究其遗传机制对于玉米品质育种具有重要意义。不同基因型玉米种质资源籽粒氮含量间存在显著差异^［

13-15］。本研究利用遗传基础广泛的252份玉米自交系构建的关联群体进行籽粒氮含量相关表型与全基因组的关联分析，结果表明该群体在2个试验点的籽粒氮含量均符合正态分布，且无显著差异，可用于全基因组关联分析。同时，鉴定挖掘出郑Q216、4N506、齐318等一批2个试验点籽粒氮含量较高的玉米自交系，为后续高蛋白质含量的玉米种质资源创新及新品种选育提供可靠的材料基础。

本研究利用BLINK、FarmCPU、GLM、MLM、MLMM和SUPER方法共发现13个与籽粒氮含量显著关联的SNP（P<3.64E-07），主要分别分布于染色体Bin1.01、Bin1.05、Bin3.03、Bin3.09、Bin4.09、Bin5.09、Bin6.02、Bin7.05和Bin9.06等区间。其中，Bin3.03区间内的位点S3_8879213在GLM、MLM、BLINK、SUPER和MLMM方法中均能检测到，Bin9.03区间内位点S9_146173702在GLM、MLM、FarmCPU和MLMM方法中均能检测到，Bin5.09区间内位点S5_114774030在GLM、MLM和SUPER方法中均能检测到，Bin7.05区间内位点S7_182217338在GLM、MLM和BLINK方法中均能检测到，Bin1.01区间内位点S1_10906326在BLINK和FarmCPU方法中均能检测到，Bin1.05区间内位点S1_177528813在GLM和SUPER方法中均能检测到。推测这6个区间为重要的籽粒氮含量基因组区间，而区间内位点S3_8879213、S9_146173702、S5_114774030、S7_18221733、S1_10906326和S1_177528813可能是控制籽粒氮含量的重要位点。但是6种全基因组关联分析方法，在2个不同试验点间未定位到共同的SNP位点。

本研究共挖掘玉米籽粒氮含量相关候选基因25个，其中，Zm00001eb121990、Zm00001eb122000、Zm00001eb121920、Zm00001eb397820、Zm00001eb330680、Zm00001eb330700、Zm00001eb330710、Zm0000 1eb031720、Zm00001eb031730、Zm00001eb330690、Zm00001eb330720、Zm00001eb003910、Zm00001eb003920和Zm00001eb003930为不同方法共定位SNP位点区间内发现的候选基因。候选基因Zm00001eb121990主要参与乙烯生物合成途径，Caicedo等^［

19］发现其参与玉米衰老过程。候选基因Zm00001eb122000与植物生长发育相关，并通过影响植物激素脱落酸、乙烯等植物激素信号传导和转录因子活性，调控植物抗逆反应。候选基因Zm00001eb121920在核糖体RNA（rRNA）加工中发挥作用^{［参考文献 20

百度学术}20］。候选基因Zm00001eb397820参与赤霉素生物合成，对于植物生长具有重要性，影响玉米生长速率、生物量和株高等性状^{［参考文献 21-23}21-23］。候选基因Zm00001eb330680是bZIP58（Basic leucine zipper 58）转录因子家族一员，在植物中发挥着重要的调控作用，参与了许多生长、发育和应激响应的过程，Wang等^{［参考文献 24

百度学术}24］发现OsbZIP58是淀粉合成核心组件，其突变体呈白垩状，总淀粉含量和直链淀粉含量减低。且OsbZIP58参与调控植物花和种子的发育、生物和非生物胁迫应答等诸多生物学过程，影响玉米铁锌元素生物强化^{［参考文献 25

百度学术}25］。候选基因Zm00001eb330700介导可溶性蛋白在植物中液泡转运，诱导脱落酸生物合成^{［参考文献 26

百度学术}26］，Lin等^{［参考文献 27

百度学术}27］发现其可能参与玉米果穗夹角形态建成。候选基因Zm00001eb330710参与植物的生长发育、逆境胁迫等，影响玉米耐寒性和苗期缺钾响应^{［参考文献 28-30}28-30］。候选基因Zm00001eb031720和Zm00001eb031730编码的蛋白是生长素响应因子，在低氮条件下参与了表皮生长素信号通路，从而刺激根毛伸长^{［参考文献 31

百度学术}31］。候选基因Zm00001eb330690在调节植物生长发育和应对非生物胁迫中发挥重要作用^{［参考文献 32

百度学术}32］。候选基因Zm00001eb330720通过染色质泛素化促进DNA修复或转录调控^{［参考文献 33

百度学术}33］。候选基因Zm00001eb003910参与植物根、茎、叶、花的器官发育，在植物的生长发育过程中起着至关重要的作用，是玉米愈伤组织诱导的关键基因^{［参考文献 34-35}34-35］。位点S1_10906326上下游50 kb区间挖掘到的候选基因Zm00001eb003910、Zm00001eb003920和Zm00001eb003930，它们编码的蛋白质富含LATERAL ORGAN BOUNDARIES DOMAIN（LOB）结构域，参与调控多种生物学过程，包括侧向器官发育、病原菌反应以及无机氮元素的摄取。在玉米中RTCS（Rootless concerning crown and seminal roots）是富含LOB结构域的蛋白，参与胚乳根和胚后叶生根系统的形成^{［参考文献 36-38}36-38］。在拟南芥中，过表达MsLBD48会导致生长迟缓和生物量显著下降^{［参考文献 39

百度学术}39］。

为了进一步筛选到与玉米氮代谢过程相关度较高的候选基因，本研究通过比较25个候选基因在经过硝酸盐补充处理后的表达水平，发现候选基因Zm00001eb275080和Zm00001eb330700的表达水平存在显著变化。其中Zm00001eb275080编码wrky114转录因子，有报道推测WRKY转录因子可能参与水稻氮源调节过程^［

40］。Zm00001eb330700编码液泡分选蛋白受体1，这2个候选基因在施加氮源后都显著上调^{［参考文献 41

百度学术}41］。另外，Zm00001eb330700下游基因Zm00001eb330710编码wrky17，施加氮源后表达谱也存在上调，说明WRKY转录因子可能正向调控氮的转运。结果表明，这2个候选基因为籽粒氮含量重要候选基因。本研究在玉米籽粒氮含量显著SNP位点挖掘的基础上，对其相关候选基因进行了预测，为进一步解析遗传机理提供基础。

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